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熒光顯微鏡是一種對能發(fā)熒光的物質(zhì),或經(jīng)熒光色素染色后能發(fā)熒光的物質(zhì)進(jìn)行觀察的顯微鏡。它有如下特點:
1.它以紫外光或紫單色光激發(fā)標(biāo)本的熒光。因紫外光是不可見光,故由標(biāo)本發(fā)出的熒光與背景反差很大。熒光顯微鏡通常是在黑暗的背景下觀察彩色圖像的,而普通顯微鏡是在亮的背景下觀察較暗的樣品的c熒光顯微鏡的對比度約為普通顯微鏡的100倍,因此可觀察到用普通顯微鏡看不到的結(jié)構(gòu)和細(xì)節(jié)。
2.用肉眼或普通顯微鏡觀察經(jīng)熒光色素染色的樣品對,只可看到整個標(biāo)本僅以同一顏色著色。而用熒光顯微鏡觀察時,標(biāo)本會發(fā)出染色色素*的熒光.呈現(xiàn)出標(biāo)本的彩色圖像,易于鑒別,可減輕眼睛的疲勞。
3.用熒光色索染色,方法簡單,制作標(biāo)本容易.有利于快速工作。
4.用于染色的熒光色素只要很低的濃度(如1:100000)就能發(fā)出明亮的熒光,一般對機體無毒,故有利于活體觀察,如研究功能器官的變化過程和細(xì)微結(jié)構(gòu).某些代謝過程的變化等等。
5.利用熒光還有助于分析物質(zhì)的化學(xué)成分。例如,組織中有些重要成分能與藥物起作用而發(fā)熒光,據(jù)此可鑒定它們的存在或定位。
日前世界各國已生產(chǎn)出有各種特色的熒光顯微鏡。按照照明裝置和觀察顯微鏡之間的聯(lián)結(jié)方式可分為分離型照明裝置、配裝閉合型照明裝置、內(nèi)裝固定照明型顯微鏡3種類型。
在分離型中,照明裝置與顯微鏡分開,可獨立配置,如配合手持顯微鏡使用截止濾光片可直接觀察熒光。該型制造簡便,價格低,但若不小心碰撞,容易使光軸不重合,造成偏位,調(diào)整較困難,而刀在照明裝置與顯微鏡之間易有紫外線泄漏至光路之外。用于熒光抗體法時,若亮度不充分,光軸的少量偏位就會妨害觀察,使用時應(yīng)格外注意。
配裝閉合型中,顯微鏡裝置在照明裝置的底座上,顯微鏡固定于底座,所以比分離型易調(diào)整光軸,穩(wěn)定性好。但其靈活性差,不使用于手持顯微鏡。該型的照明裝置配用同一廠生產(chǎn)的顯微鏡才能發(fā)揮*效能。另一優(yōu)點是比分離型紫外漏光少,如配用普通標(biāo)準(zhǔn)型顯微鏡,裝上截止濾光片,也可用于熒光觀察,且這樣組合的裝置價格較便宜。
內(nèi)裝固定型是將光源、照明光學(xué)系統(tǒng)、各種濾光板及觀察顯微鏡組成—體,裝于堅固的鏡體中,是的熒光顯微鏡,其光軸更合完善,調(diào)整時不必?fù)?dān)心偏位,而巳激勵光的漏光極少。它是熒光觀察中zui適用的顯微鏡,但價格較高。
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